YFXEH00034
48T/ 96T
￥1000/ ￥1500
檢測(cè)人相關(guān)樣本中腫瘤壞死因子α(TNF-α)的含量
人
雙抗體一步夾心法
本試劑盒采用雙抗體一步夾心法測(cè)定標(biāo)本中腫瘤壞死因子α(TNF-α)的水平。向預(yù)先包被腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。
1、準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值≥ 0.9900。
2、靈敏度：最低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。
檢測(cè)人相關(guān)樣本中的腫瘤壞死因子α(TNF- α)，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
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試劑盒成分 |
96孔 |
48孔 |
儲(chǔ)存溫度 |
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說明書 |
1份 |
1份 |
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封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
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密封袋 |
1個(gè) |
1個(gè) |
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微孔酶標(biāo)板 |
12孔×8條 |
12孔×4條 |
2-8℃ |
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標(biāo)準(zhǔn)品 |
0.3mL*6管 |
0.3mL*6管 |
2-8℃ |
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注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0pg/mL、5pg/mL、10pg/mL、20pg/mL、40pg/mL、80pg/mL。 |
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樣本稀釋液 |
6mL |
3mL |
2-8℃ |
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檢測(cè)抗體-HRP |
10mL |
5mL |
2-8℃ |
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20×洗滌緩沖液 |
25mL |
15mL |
2-8℃ |
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注：20×洗滌緩沖液使用前用蒸餾水按1：20的比例稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。 |
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底物A |
6mL |
3mL |
2-8℃ |
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底物B |
6mL |
3mL |
2-8℃ |
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終止液 |
6mL |
3mL |
2-8℃ |
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4（建議組織重量與PBS體積比例為1:9，即1g組織，加入 9mL PBS）。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�。�?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
1、試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正�，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2、實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3、濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
4、嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5、所有液體組分使用前充分搖勻。
※ IF=3.7, Hong Duan, Han Li, Tianyi Liu, et al. Exploring the Molecular Mechanism of Schisandrin C for the Treatment of Atherosclerosis via the PI3K/AKT/mTOR Autophagy Pathway. ACS Omega ，2024, 9, 32920−32930.
※ IF=11.4，Li Chen，Tangdi Xu，Zixuan Wang，et al. Loss of Nup155 promotes high fructose-driven podocyte senescence by inhibiting INO80 mRNA nuclear export. Journal of Advanced Research, https://doi.org/10.1016/j.jare.2024.08.007.
※ IF=11.413. Kefeng Zhai, Hong Duan, Wei Wang, et al. Ginsenoside Rg1 ameliorates bloodebrain barrier disruption and traumatic brain injury via attenuating macrophages derived exosomes miR-21 release. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2021 Nov;11(11):3493-3507.
※ IF=5.279. Ke-feng Zhai, Cai-yue Cui, et al. Liquiritin from Glycyrrhiza uralensis Attenuating Rheumatoid Arthritis via Reducing Inflammation, Suppressing Angiogenesis, and Inhibiting MAPK Signaling Pathway. Agric. Food Chem. 2019, 67, 10, 2856–2864.
