產(chǎn)品簡介

細胞收取后處理方式

1、收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。 

2、請在4或5×顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3、懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，需收集T25瓶中的懸浮細胞，離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。

4、貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

5、備注：運輸用的培養(yǎng)基不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

細胞傳代

1、細胞密度達到80-90%左右時，吸去舊培養(yǎng)基留存2mL左右培養(yǎng)基，用細胞刮輕輕刮下細胞（或者培養(yǎng)基變黃后把細胞吹打下來），然后用槍頭輕輕吹勻，首次傳代比例為1：2，第二天觀察，基本可以長滿，后續(xù)傳代按照1：3-1：5左右進行傳代，2天左右傳代一次，不能傳代太稀，不能讓細胞長爆滿。

2、收到細胞后傳代兩次后請必須凍存一批細胞，后續(xù)看情況必須凍存夠10支左右細胞，RAW264.7即使按照這個方法培養(yǎng)，傳代20-30次后也會出現(xiàn)分化，當顯微鏡下觀察一個細胞出現(xiàn)3個以上觸角，出現(xiàn)觸角的細胞達到50號以上，細胞即不能繼續(xù)使用。

細胞復蘇

將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含 4-6mL 完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含 6-8mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中 37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

細胞凍存

收到細胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面 T25 瓶為例：

1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為 1×106~1×107個活細胞/mL。

2、1000rpm 離心 3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1mL 凍存液含 1×106~1×107個活細胞/mL 分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80 度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項

1. 在細胞生長的初始階段，細胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有“偽足”延伸。隨著培養(yǎng)時間的增加，細胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度，會有細胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細胞會同時出現(xiàn)。

2. 該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時，用無菌細胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。

3. 該細胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應收集起來，離心后細胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。

4. 血清質(zhì)量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應選用高質(zhì)量的胎牛血清。

5. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

6. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。